*液相色谱仪 色谱仪应用 液相色谱仪方法
食品中着色剂*液相色谱仪(HPLC)检测方案
1 仪器与试剂
1.1 仪器 梯度*液相色谱仪，配紫外 色谱柱 C18 250mm×4.6mm×5μm 超声波水浴 分析天平（感量0.001g） 0.45μm水性滤膜
1.2 试剂 甲醇，色谱纯。 正己烷。 聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛 磷酸，色谱纯。 柠檬酸溶液：称取20克柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀。 乙酸铵溶液（0.02mol/L）称取1.54克乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经经0.45μm水性滤膜过滤。 无水乙醇-氨水-水（7+2+1）：量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL混匀。合成着色剂标准液：准确称取按其纯度折算为*质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100克，置于100mL容量瓶中，加pH=6水到刻度，配成水溶液。
2 测定原理
食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液液分配法提取，制成水溶液，注入*液相色谱仪，经反相色谱分离。
3 试样溶液的制备
称取试样5.000g-10.000g(精确至0.0001g)，置于100ml烧杯中，加100ml水，用柠檬酸溶液调pH到6，加热至60度，将1克聚酰胺粉加少许水调成糊状，倒入试样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用pH=4的水洗涤3-5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3-5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3-5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经0.45μm水性滤膜过滤，进*液相色谱仪测定。
4 色谱条件
色谱柱：C18 250mm×4.6mm×5μm； 流动相：以20mmol乙酸铵为流动相A，以甲醇为流动相B，按下表规定经行梯度洗脱；
时间（分钟） | 流动相A（%） | 流动相B |
0 | 80 | 20 |
5 | 65 | 35 |
15 | 15 | 85 |
17 | 2 | 98 |
22 | 2 | 98 |
22.1 | 80 | 20 |
30 | 80 | 20 |
流速：1.0mL/min； 温度：室温； 进样量：20μL； 检测波长：254nm。
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